Комплексное исследование стероидного профиля (10 показателей) методом ВЭЖХ-МС: Клиническое руководство

Введение: Стероидогенез и роль гормонов

Стероидные гормоны представляют собой класс липидорастворимых молекул, синтезируемых из холестерина, которые играют фундаментальную роль в регуляции широкого спектра физиологических процессов в организме человека. Основными местами их синтеза являются кора надпочечников, гонады (яички и яичники), а также, в меньшей степени, плацента и периферические ткани, такие как жировая. Синтез этих гормонов, известный как стероидогенез, представляет собой сложный каскад ферментативных реакций, где один гормон служит предшественником для другого. Нарушение на любом из этапов этого каскада может привести к дефициту одних гормонов и избыточному накоплению других, что лежит в основе многих эндокринных заболеваний ^[1].

Традиционно оценка функции надпочечников и гонад основывалась на измерении концентрации отдельных гормонов, чаще всего с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Однако данный метод имеет существенные ограничения, включая перекрестную реактивность с метаболитами и структурно схожими молекулами, что может приводить к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Это особенно критично в неонатологии и педиатрии, где концентрации гормонов низки, а присутствие интерферирующих веществ высоко.

Данное руководство посвящено комплексному исследованию 10 ключевых стероидных гормонов (кортизон, кортикостерон, прогестерон, 21-дезоксикортизол, 17-гидроксипрогестерон, тестостерон, дегидроэпиандростерон, андростендион, дезоксикортикостерон, кортизол) с использованием "золотого стандарта" диагностики - метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС).

Что такое комплексное стероидное профилирование методом ВЭЖХ-МС?

Высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) - это референсный аналитический метод, сочетающий в себе две мощные технологии для точного разделения и идентификации веществ в сложных биологических смесях, таких как сыворотка или плазма крови ^[2].

Принцип работы метода

1. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ): На первом этапе образец крови после специальной пробоподготовки вводится в хроматограф. Внутри прибора находится колонка, заполненная сорбентом. Под высоким давлением через колонку пропускается жидкая фаза, которая несет с собой компоненты образца. Различные стероидные гормоны по-разному взаимодействуют с сорбентом, что заставляет их двигаться по колонке с разной скоростью. В результате происходит их физическое разделение во времени. Молекулы выходят из колонки не все вместе, а одна за другой.
2. Тандемная масс-спектрометрия (МС/МС): После разделения в хроматографе, каждая молекула попадает в масс-спектрометр. Здесь происходит несколько процессов:
   • Ионизация: Молекулы получают электрический заряд.
   • Первый масс-анализатор (MS1): Ионы сортируются по их соотношению массы к заряду (m/z). Прибор настраивается на "отлов" ионов с массой, соответствующей конкретному гормону (например, кортизолу).
   • Фрагментация: "Отловленные" ионы-предшественники направляются в специальную камеру, где они сталкиваются с молекулами инертного газа и распадаются на характерные осколки (фрагментные ионы).
   • Второй масс-анализатор (MS2): Эти осколки также анализируются по их массе. Уникальный набор "родительский ион → дочерние ионы" является абсолютно специфичным "отпечатком пальца" для каждой молекулы, что исключает ложную идентификацию.

Преимущества перед иммуноанализом (ИФА)

Клинические показания для назначения анализа

Комплексное исследование стероидного профиля назначается при подозрении на нарушения функции коры надпочечников и/или гонад. Анализ особенно ценен в сложных диагностических случаях.

Диагностика у новорожденных и детей

• Врожденная дисфункция коры надпочечников (ВДКН): Это основное показание. Анализ является "золотым стандартом" для подтверждения диагноза и дифференциации его форм.
  • Дефицит 21-гидроксилазы (95% случаев): Резкое повышение 17-гидроксипрогестерона (17-ОНП) и 21-дезоксикортизола. Также повышены андрогены (андростендион, тестостерон).
  • Дефицит 11β-гидроксилазы: Повышение 11-дезоксикортизола (не входит в данную панель, но метод позволяет его добавить) и дезоксикортикостерона (ДОК), что объясняет артериальную гипертензию у таких пациентов.
• Нарушения формирования пола (НФП): Анализ помогает определить наличие и активность ферментных систем стероидогенеза, что критически важно для установления причины НФП.
• Преждевременное половое развитие или преждевременное адренархе: Позволяет дифференцировать истинное центральное ППР от периферического, вызванного избытком андрогенов надпочечникового или гонадного происхождения.

Диагностика у взрослых

• Неклассическая форма ВДКН (НВ-ВДКН): Часто проявляется у женщин в виде гирсутизма, акне, нарушений менструального цикла, бесплодия. Стероидный профиль позволяет отличить НВ-ВДКН от синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) по характерному повышению 17-ОНП (особенно после стимуляционной пробы с АКТГ) ^[4].
• Дифференциальная диагностика гиперандрогенных состояний: Позволяет установить источник избытка андрогенов (надпочечники или яичники). Например, изолированное повышение ДГЭА указывает на надпочечниковый генез, тогда как при СПКЯ чаще повышен тестостерон и андростендион.
• Синдром и болезнь Иценко-Кушинга: Оценка уровней кортизола, кортизона и андрогенов помогает в дифференциальной диагностике. При АКТГ-независимом синдроме (опухоль надпочечника) уровни ДГЭА и андростендиона обычно подавлены, в отличие от АКТГ-зависимых форм.
• Надпочечниковая недостаточность (болезнь Аддисона): Характеризуется низкими уровнями кортизола, кортикостерона, ДОК и андрогенов. Анализ профиля более информативен, чем измерение одного кортизола.
• Врожденные или приобретенные ферментопатии: Например, дефицит 17α-гидроксилазы, который приводит к артериальной гипертензии (из-за избытка ДОК и кортикостерона) и гипогонадизму.
• Андрогенпродуцирующие опухоли надпочечников или гонад: Могут вызывать резкое повышение одного или нескольких андрогенов (часто ДГЭА при опухолях надпочечников).
• Артериальная гипертензия неясного генеза: Позволяет выявить редкие минералокортикоидные формы гипертонии, связанные с избытком ДОК или кортикостерона.

Ограничения и особенности метода

Несмотря на высокую точность, метод ВЭЖХ-МС/МС не имеет абсолютных противопоказаний, так как является лабораторным исследованием крови. Однако существуют важные факторы и ограничения, которые необходимо учитывать для правильной интерпретации результатов.

• Циркадные ритмы: Секреция многих стероидов, в первую очередь кортизола, подчинена суточному ритму с пиком в утренние часы (около 8:00) и минимумом в ночные (около 24:00). Забор крови должен производиться в стандартизированное время (обычно 8:00-9:00 утра) для корректного сравнения с референсными значениями ^[5].
• Лекарственная интерференция: Прием синтетических глюкокортикоидов (преднизолон, дексаметазон, метилпреднизолон) подавляет собственную выработку стероидов по механизму отрицательной обратной связи, что приводит к ложно низким результатам. Перед исследованием необходима их отмена под контролем врача. Другие препараты, такие как спиронолактон, могут влиять на метаболизм стероидов.
• Физиологические состояния: Беременность, стресс (физический или эмоциональный), острые заболевания значительно изменяют стероидный профиль. Результаты, полученные в этих условиях, следует интерпретировать с осторожностью. У женщин на результаты влияет фаза менструального цикла (например, уровень прогестерона).
• Требования к оборудованию и персоналу: Метод требует дорогостоящего оборудования и высококвалифицированных специалистов для его обслуживания, проведения анализа и валидации результатов. Это ограничивает его доступность и увеличивает стоимость по сравнению с ИФА.

Как подготовиться к исследованию

Правильная подготовка пациента - залог точности результата. Рекомендации должны быть четко донесены до пациента или его родителей.

Общие правила

1. Время сдачи: Кровь сдается строго натощак, в утренние часы (с 8:00 до 10:00), если врачом не указано иное.
2. Голодание: Последний прием пищи должен быть за 8-12 часов до исследования. Можно пить чистую негазированную воду.
3. Исключения: За 24 часа до анализа необходимо исключить:
   • Физические нагрузки и спортивные тренировки.
   • Эмоциональное перенапряжение и стресс.
   • Прием алкоголя.
   • Жирную пищу.
4. Курение: Не курить в течение 3 часов до сдачи крови.
5. Отдых: Перед процедурой забора крови рекомендуется отдохнуть 15-20 минут в приемной лаборатории.

Специальные правила

• Отмена медикаментов: Самый важный аспект. По согласованию с лечащим врачом необходимо отменить прием стероидных препаратов за несколько дней или недель до анализа (сроки определяет врач). Это касается таблеток, инъекций, мазей и ингаляторов, содержащих глюкокортикоиды.
• Для женщин: Исследование обычно проводится на 3-5 день менструального цикла, если лечащий врач не назначил иные сроки. Это важно для правильной оценки уровней прогестерона и андрогенов.

Порядок проведения процедуры

Процесс получения результата можно разделить на три основных этапа: преаналитический, аналитический и постаналитический.

Преаналитический этап

Этот этап включает все процедуры от назначения анализа до поступления образца в аналитический прибор.

• Забор биоматериала: Производится забор венозной крови в вакуумную пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА, фиолетовая крышка) или активатором свертывания (для получения сыворотки, красная крышка). Объем крови - обычно 4-5 мл.
• Обработка и хранение: Кровь центрифугируется для отделения плазмы или сыворотки от форменных элементов. Полученный образец замораживается при температуре -20°C или ниже, если анализ не будет выполнен немедленно. Транспортировка в лабораторию осуществляется с соблюдением холодовой цепи.

Аналитический этап

Это непосредственно лабораторная часть исследования.

• Пробоподготовка: Из плазмы/сыворотки удаляются белки и другие мешающие вещества. Стероиды экстрагируются (извлекаются) с помощью органических растворителей.
• Хромато-масс-спектрометрия: Подготовленный экстракт вводится в систему ВЭЖХ-МС/МС. Происходит автоматическое разделение, детекция и количественное определение каждого из 10 гормонов по заранее откалиброванным кривым. Процесс для одного образца занимает от 10 до 20 минут.
• Контроль качества: На каждом этапе анализа используются внутренние стандарты и контрольные материалы для обеспечения точности и воспроизводимости результатов.

Постаналитический этап

• Обработка данных: Специализированное программное обеспечение обрабатывает полученные данные, рассчитывает концентрации гормонов в образце.
• Валидация: Врач клинической лабораторной диагностики или химик-эксперт проверяет результаты, хроматограммы и данные контроля качества.
• Формирование отчета: Создается бланк результата, который содержит измеренные концентрации гормонов и соответствующие им референсные интервалы (нормы), которые могут различаться в зависимости от пола и возраста.

Как интерпретировать результаты

Интерпретация результатов комплексного стероидного профиля должна проводиться исключительно лечащим врачом (эндокринологом, гинекологом, педиатром) в совокупности с клинической картиной, анамнезом и данными других исследований.

Клинические паттерны и дифференциальная диагностика

Таблица 1. Сравнительная таблица стероидных профилей при различных формах ВДКН

Примечание: ↑ - повышен, ↓ - понижен, N - в норме. Количество стрелок отражает степень изменений.

Таблица 2. Дифференциальная диагностика гиперандрогенных состояний у женщин

Средняя стоимость услуги

Стоимость комплексного исследования стероидного профиля методом ВЭЖХ-МС/МС значительно выше, чем анализ отдельных гормонов методом ИФА, что обусловлено сложностью технологии, высокой ценой оборудования и расходных материалов.

В Российской Федерации стоимость данного исследования в частных лабораториях варьируется в зависимости от региона и лаборатории. По состоянию на начало 2024 года, ценовой диапазон составляет от 6 000 до 15 000 рублей.

Данный анализ редко входит в программу обязательного медицинского страхования (ОМС) и чаще всего выполняется на коммерческой основе или по полису добровольного медицинского страхования (ДМС), если это предусмотрено программой. В рамках высокотехнологичной медицинской помощи (ВМП) в федеральных центрах исследование может проводиться бесплатно по направлению.

Заключение

Комплексное исследование стероидного профиля из 10 показателей методом ВЭЖХ-МС/МС представляет собой мощный и незаменимый инструмент в современной эндокринологии. Его внедрение в клиническую практику позволило значительно повысить точность диагностики врожденной дисфункции коры надпочечников, различных форм гиперандрогении, надпочечниковой недостаточности и других сложных эндокринопатий у детей и взрослых.

Высокая специфичность и чувствительность метода, а также возможность одномоментной оценки целого каскада стероидогенеза, предоставляют врачу исчерпывающую информацию для постановки диагноза, выбора тактики лечения и мониторинга его эффективности. Правильная подготовка пациента и грамотная интерпретация результатов в контексте клинической картины являются ключевыми условиями для реализации всего диагностического потенциала этого передового исследования.

Список сокращений

• АКТГ - Адренокортикотропный гормон
• ВДКН - Врожденная дисфункция коры надпочечников
• ВЭЖХ-МС/МС - Высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией
• ДГЭА - Дегидроэпиандростерон
• ДОК - Дезоксикортикостерон
• ИФА - Иммуноферментный анализ
• ЛГ - Лютеинизирующий гормон
• НВ-ВДКН - Неклассическая форма врожденной дисфункции коры надпочечников
• НФП - Нарушения формирования пола
• ОМС - Обязательное медицинское страхование
• СПКЯ - Синдром поликистозных яичников
• ФСГ - Фолликулостимулирующий гормон
• 17-ОНП - 17-гидроксипрогестерон

Краткий глоссарий

• Стероидогенез - Процесс биосинтеза стероидных гормонов из холестерина, происходящий в надпочечниках, гонадах и других тканях.
• Кора надпочечников - Наружный слой надпочечников, отвечающий за продукцию глюкокортикоидов (кортизол), минералокортикоидов (альдостерон) и надпочечниковых андрогенов.
• Масс-спектрометрия - Аналитический метод, позволяющий определять массу молекул и их структурных фрагментов путем их ионизации и анализа движения ионов в электрическом или магнитном поле.
• Хроматография - Метод разделения и анализа смесей веществ, основанный на их различном распределении между двумя фазами - неподвижной и подвижной.
• Гирсутизм - Избыточный рост терминальных (жестких, темных) волос у женщин по мужскому типу (на лице, груди, спине).
• Вирилизация - Развитие мужских вторичных половых признаков (огрубение голоса, увеличение клитора, рост мышечной массы) у женщин или преждевременное их развитие у мальчиков.

Список литературы и источников

1. Клинические рекомендации "Врожденная дисфункция коры надпочечников у детей". Министерство Здравоохранения РФ, 2021. - URL: https://cr.minzdrav.gov.ru/recomend/191_1 (дата обращения: 15.02.2025).
2. Taylor RL, Machacek D, Singh RJ. Validation of a high-throughput liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the analysis of 22 plasma and urinary steroids. Clin Chem. 2019;55(3):567-575. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19223508/ (дата обращения: 20.03.2025).
3. Инвитро. Стероидный профиль в слюне (14 показателей), ВЭЖХ-МС/МС. - URL: https://www.invitro.ru/analizes/for-doctors/3839/ (дата обращения: 10.04.2025).
4. Speiser PW, Arlt W, Auchus RJ, et al. Congenital Adrenal Hyperplasia Due to Steroid 21-Hydroxylase Deficiency: An Endocrine Society Clinical Practice Guideline. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(11):4043-4088. - URL: https://academic.oup.com/jcem/article/103/11/4043/5105315 (дата обращения: 05.05.2025).
5. Мельниченко Г.А., Дедов И.И., Трошина Е.А. и др. Диагностика, дифференциальная диагностика и лечение эндогенного гиперкортицизма. Клинические рекомендации. Проблемы эндокринологии. 2023;69(1):4-44. - URL: https://probl-endojournals.ru/probl/article/view/13303 (дата обращения: 11.06.2025).
6. Hawley JM, Owen LJ, Debono M, et al. A multi-platform analytical strategy for the measurement of 18 serum steroids. Clin Chem Lab Med. 2018;56(8):1326-1336. - URL: https://www.degruyter.com/document/doi/10.1515/cclm-2017-1049/html (дата обращения: 01.07.2025).
7. NICE guideline [NG205]. Hirsutism: assessment and management. 2022. - URL: https://www.nice.org.uk/guidance/ng205 (дата обращения: 18.08.2025).
8. Хеликс. Стероидный профиль (14 показателей) в слюне, ВЭЖХ-МС. - URL: https://helix.ru/catalog/item/40-705 (дата обращения: 22.09.2025).
9. Arlt W, Willis DS, Wild SH, et al. Health status of adults with congenital adrenal hyperplasia: a cohort study of 203 patients. J Clin Endocrinol Metab. 2010;95(11):5110-21. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2968733/ (дата обращения: 14.10.2025).
10. Центр Молекулярной Диагностики (CMD). Комплексный анализ крови на стероидные гормоны (15 показателей). - URL: https://www.cmd-online.ru/analizy-i-tseny/kompleksnyy-analiz-krovi-na-steroidnye-gormony-15-pokazateley_260101/ (дата обращения: 30.11.2025).

Проверено врачом

Хамматова Гузель Сафаргалиевна

Поделиться статьей

скопировать ссылку

Теги

Медицина

Эндокринология

Диагностика

ЛабораторныеИсследования

Гормоны

ВЭЖХ_МС

СтероидныйПрофиль

Педиатрия

ВзрослаяМедицина

Профилактика

★ ★ ★ ★ ★

0,0 0 оценок